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本文目录

1. 一代测序和二代测序的区别
2. 单细胞测序和三代测序有什么区别
3. 一代测序，二代测序，三代测序的优点缺点分别是什么，求大神赐教
4. 高通量测序技术有哪些

一代测序和二代测序的区别

二代测序相比一代测序大幅降低了成本，保持了较高准确性，并且大幅降低了测序时间，将一个人类基因组从3年降为1周以内，但在序列读长方面比起第一代测序技术则要短很多，这也给三代测序提供了发展空间。

一代测序：又称Sanger测序

原理：ddNTP的2＇和3＇都不含羟基，其在DNA的合成过程中不能形成磷酸二酯键，可以用来中断DNA合成反应。在4个DNA合成反应体系（含dNTP）中分别加入一定比例带有标记的ddNTP（分别为ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP），通过凝胶电泳和放射自显影后可以根据电泳带的位置确定待测分子的DNA序列。

二代测序：NGS技术（多分子，多克隆）

背景：Sanger测序虽读长较长、准确性高，但由于其测序成本高、通量低等缺点，难以在denovo测序、转录组测序等方面普及应用。经过不断的技术开发和改进，以Roche公司的454技术、illumina公司的Solexa、Hiseq技术，ABI公司的Solid技术为标志的第二代测序技术诞生，后起之秀ThermoFisher的IonTorrent技术近年来也杀入历史舞台。

1、Illumina原理：

桥式PCR+4色荧光可逆终止+激光扫描成像

主要步骤：

①DNA文库制备—超声打断加接头

②Flowcell—吸附流动DN**段

③桥式PCR扩增与变性—放大信号

④测序—测序碱基转化为光学信号

特点：Illumina的这种测序技术每次只添加一个dNTP的特点能够很好的地解决同聚物长度的准确测量问题，它的主要测序错误来源是碱基的替换。而读长短（200bp-500bp）也让其应用有所局限。

2、Roche454

油包水PCR+4种dNTP车**战+检测焦磷酸水解发光

单细胞测序和三代测序有什么区别

第一代测序：指双脱氧末端终止法，扩增后通过毛细管电泳读取序列，每次获取数据量少。

2.

第二代测序：为高通量测序，采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测。

3.

第三代测序：特点是单分子测序，多基于纳米科技，无需扩增，对单分链DNA/RNA直接用合成、降解、通过纳米孔等方式直接测序，核心特点是无需扩增所以成本更低。

一代测序，二代测序，三代测序的优点缺点分别是什么，求大神赐教

第一代指双脱氧末端终止法，扩增后通过毛细管电泳读取序列，每次获取数据量少第二代为高通量测序，采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测。

第三代特点是单分子测序，多基于纳米科技，无需扩增，对单分链DNA/RNA直接用合成、降解、通过纳米孔等方式直接测序，核心特点是无需扩增所以成本更低

高通量测序技术有哪些

高通量测序技术有海量平行签名测序、MPSS、聚合酶克隆(Polony测序)、454焦磷酸测序(454pyrosequencing)、Illumina(Solexa)测序、ABI固体测序、离子半导体测序、DNA纳米球测序等。

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