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一、什么是凯氏定氮法

凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔创建的一种常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物的常用方法。

凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的通常占其总质量的16%左右(12%~一19%),因此，通过测定物质中的便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质)，即:蛋白质含量=/16%。凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法

二、定氮法测定蛋白质的原理

定氮法测定蛋白质的是通过测出样品中的总再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质的含量,此法的结果称为粗蛋白质含量。

原理：有机含氮化合物与浓共热消化，氮转化为氨，再与结合成铵。铵与强碱反应，放出氨。将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中，再用标准碱溶液进行滴定。根据测得的氨量，计算样品的总氮量。、试剂与材料：浓、钾-铜粉末(称取80g钾和20g铜(五水)，0.3g研细混合)、30%溶液、2%硼酸溶液、0.01M标准盐酸、混合指示剂(田氏指示剂)储存液(取50ml0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200ml0.1%甲基红溶液混合，储存于棕色瓶中备用。

克氏定氮法：天然含氮有机化合物（如蛋白质）与浓共热时分解出氨，氨与反应生成铵。在克氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使铵分解出氨。用水蒸气蒸馏法将氨蒸入硼酸溶液中，然后再用标准稀酸溶液进行滴定，滴定所用稀酸的量（mol）相当于被测样品中氨的量（mol），根据所测得的氨量即可计算样品的。

原理是因为蛋白质通常在16%左右，所以将克氏定氮法测得的乘上系数6.25，便得到该样品的蛋白质含量。

三、自动定氮仪的使用方法

使用方法如下：明确结论：需要按照严格的操作流程来操作，才能得出准确的结果。解释原因：自动定氮仪是一种高精度的仪器，需要进行仔细的操作和维护，否则会影响仪器的精度和稳定性。使用方法一般包括样品准备、仪器装载、程序设置、起始测点设置、结束测点设置等步骤。内容延伸：在使用自动定氮仪的过程中，需要注意仪器的维护保养和安全使用，同时也需要根据实际情况进行数据分析和处理，从而得出准确的分析结果。为了确保分析质量，建议对仪器进行仔细的装载和操作。

四、定氮啥意思

定氮是由丹麦化学家凯道尔于1883年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物的常用方法。

凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的通常占其总质量的16%左右(12%~一19%),因此，通过测定物质中的便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质)，即:蛋白质含量=/16%。

五、定氮仪检定规程

1称量称取0.1g（准确至0.0001g）氯化铵或铵标准物质，置于定氮瓶消化管中，残留在容器中的氯化铵或铵标准物质可以用去离子水洗入管中。

2消化在消化管中加入6g钾和0.2g铜，量取12~15mL浓，徐徐加入到消化管中，混合后置于定氮仪已经预热的模块中。接通冷凝水，打开抽气泵，逐渐增加温度防止有泡沫冲出。当烧瓶内容物的颜色逐渐变成透明的淡绿色时，继续消化0.5~1h.

3转移将消化好的样品冷却，沿瓶壁吹入少许水，水迸出转入100mL容量瓶中，以水冲洗消化管多次，至容量瓶内液体的体积约100mL,冷却后定容、摇匀。

4蒸馏接好定氮装置，加入数粒玻璃珠防止暴沸，加热煮沸水蒸汽发生瓶内的水，接通冷凝水。在接收瓶中加入50.0mL硼酸溶液（20g/L）和3滴甲基红-溴甲酚绿混合指示剂，使冷凝器的出液端口位于接收瓶液面以下。将10~20mL消化液小心移入定氮器的蒸馏瓶中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，再缓慢加入10mL溶液（400g/L）,通入蒸汽进行蒸馏。蒸馏4min后，稍移动接收瓶，使出液口位于液面之上，流出的蒸馏液沿瓶壁4校准项目和校准方法。

4.1空白示值仪器开机，预热10min,按操作步骤进行，除不加氯化铵或铵标准物质外，其它过程和样品的测量相同。连续测量5次，每次测量所消耗的酸标准溶液的体积与前一次测量所消耗的酸标准溶液的体积之差作为空白示值。

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